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    制備單克隆抗體時(shí)有哪些具體步驟

    點(diǎn)擊次數(shù):1021  更新時(shí)間:2023-12-19
    一抗可用于檢測(cè)糖尿病、癌癥、阿爾茨海默病和帕金森病的生物標(biāo)志物。二抗則主要用于檢測(cè)和純化抗原蛋白。二抗在標(biāo)記和檢測(cè)方面比較靈敏和靈活。所以,它們?cè)诹魇郊?xì)胞術(shù)、蛋白質(zhì)印跡和細(xì)胞成像等一系列應(yīng)用中用于一抗的比色、化學(xué)發(fā)光和熒光檢測(cè)。二抗類型的選擇基于一抗的類別:免疫球蛋白IgG或IgM、標(biāo)簽類型和來(lái)源宿主。
    制備單克隆抗體時(shí)有哪些具體步驟:
    一、免疫動(dòng)物選擇
    根據(jù)需要產(chǎn)生目標(biāo)抗原的免疫反應(yīng),選擇合適的免疫動(dòng)物。例如,小鼠是免疫動(dòng)物之一,因其易于操作且在免疫應(yīng)答方面較為強(qiáng)大。
    二、抗原免疫
    將目標(biāo)抗原注射到免疫動(dòng)物體內(nèi),通常需要多次免疫以激發(fā)免疫反應(yīng)。可以選擇不同的免疫路線,如皮下、腹腔、靜脈等。
    三、細(xì)胞融合
    從免疫動(dòng)物獲得脾細(xì)胞或淋巴細(xì)胞,與骨髓瘤細(xì)胞或其他癌細(xì)胞(如SP2/0、NS0等)融合,形成雜交瘤細(xì)胞。融合細(xì)胞通常使用(PEG)或電穿孔等方法促進(jìn)細(xì)胞融合。
    四、雜交瘤細(xì)胞篩選
    對(duì)融合細(xì)胞進(jìn)行篩選,一般使用HAT選擇性培養(yǎng)基,通過(guò)對(duì)非雜交瘤細(xì)胞和單克隆雜交瘤細(xì)胞的抗代選擇,篩選出產(chǎn)生目標(biāo)抗體的單克隆雜交瘤細(xì)胞。
    五、單克隆抗體生產(chǎn)
    從篩選出的單克隆雜交瘤細(xì)胞中獲取單一細(xì)胞系,并進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)和產(chǎn)生抗體。一般可采用體外或體內(nèi)方式。
     
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