商品屬性：

Fluo-4 鈣離子檢測試劑盒是一種基于 Fluo-4 AM 鈣離子熒光探針檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的試劑盒。本試劑盒可以使用熒光顯微鏡進(jìn)行熒光成像檢測，也可以使用熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀進(jìn)行熒光的定量檢測。使用熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀還可以進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的動態(tài)變化檢測。Fluo-4 是一種將 Fluo-3 結(jié)構(gòu)中的 Cl 離子替換成 F 離子的鈣熒光探針。由于將 Cl 離子替換成了電子吸引力更強(qiáng)的 F 離子，它的最大激發(fā)波長會向短波長方向偏離 10 nm 左右。這個波長更接近于氬激光器的波長，所以用氬激光器激發(fā)時，Fluo-4 的熒光強(qiáng)度比 Fluo-3 更強(qiáng)。

標(biāo)記：

1.將細(xì)胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基。

2.提前將2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后將150微升2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基與等體積細(xì)胞培養(yǎng)基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養(yǎng)基，這樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度。②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜。

3.孵育細(xì)胞2 h，棄培養(yǎng)基。

【注】：①培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)。②大多數(shù)腫瘤細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細(xì)胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度。

實驗步驟：

1. 將細(xì)胞以 104-105 個細(xì)胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養(yǎng)基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養(yǎng)箱中在 37℃ 下培養(yǎng)細(xì)胞 24 小時。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質(zhì)。

3. 在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當(dāng)時間（如 6、12、24 或 48 小時）。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標(biāo)儀測量 450nm 處的吸光度。

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